目的 观察家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽对K562细胞核和线粒体膜电位及K562细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响,进而探讨家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽是否可以影响线粒体膜电位及促进K562细胞凋亡。方法 首先采用Hoechst33258荧光标记法,将家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞,用荧光显微镜检测K562细胞核荧光强度的变化;其次采用荧光探针罗丹明123 标记K562细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察K562细胞中罗丹明123荧光强度,以细胞内荧光强度表示线粒体膜电位大小;最后用caspase-3检测试剂盒和酶标仪测定K562细胞caspase-3的含量。结果 采用Hoechst33258荧光标记法,用荧光显微镜观察到家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞后部分细胞核的荧光强度增强,说明其可以引起K562细胞发生凋亡;用罗丹明123标记,激光共聚焦显微镜观察发现,家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用组的K562细胞荧光强度值明显低于对照组(t₁=21.30,t₂=196.23,P<0.05),说明家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽可以使K562细胞线粒体膜电位降低;峰5、峰8组分作用组caspase-3的含量明显高于对照组(t₁=146.92,t₂=189.56,P<0.05),说明3龄幼虫抗肿瘤肽可以促进K562细胞发生凋亡。结论 家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽峰5、峰8组分对K562细胞核具有损伤作用,可以引起K562细胞发生凋亡,作用机制是通过降低K562细胞线粒体膜电位,激活caspase-3,扰乱其生理功能,促使其凋亡。

目的 探讨家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用。方法 通过针刺感染大肠埃希菌诱导家蝇3龄幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化家蝇3龄幼虫抗菌肽,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法和光镜观察法筛选对K562有抑制作用的抗菌肽；用不同质量浓度的峰5、峰8处理K562细胞,采用台盼蓝拒染法测定细胞存活率和生长曲线的变化；用光学显微镜和荧光显微镜检测细胞膜形态的变化；用荧光分光光度计检测细胞膜荧光素的渗漏；用激光共聚焦显微镜观察细胞膜的损伤程度。结果 低质量浓度(＜50 μg/ml)对细胞存活率无明显影响,细胞整体形态变化不大,细胞荧光素渗漏较少［(18.95±0.05)～(22.49±0.68)］,细胞损伤甚微；高质量浓度(≥50 μg/ml)使细胞存活率明显下降,细胞形态变化逐渐增大,细胞荧光素渗漏较多［(62.77±4.08)～(70.81±0.18)］,甚至大分子荧光素Dextran-FITC可以通过。结论 家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用存在质量浓度阈值,低质量浓度时可引起膜通透性增加,高质量浓度时可引起细胞膜严重损伤。家蝇幼虫抗菌肽可能通过直接杀伤作用抑制K562细胞生长,其作用机制首先是通过对膜作用,然后可能进一步对膜作用从而使膜上孔洞不断扩大或者进入细胞后经过其他途径抑制K562细胞生长。

目的 观察黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响；比较该抗菌肽与羟基脲对K562细胞的增殖抑制作用。方法 用流式细胞仪检测黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响。黄粉虫抗菌肽与羟基脲分别设置5个浓度组，用MTT比色法分别求出2种药物不同浓度对K562的抑制率，根据浓度和抑制率用SPSS软件求出回归方程和IC₅₀。结果 细胞周期G₀/G₁期和G₂/M期细胞比例增加，S期细胞比例下降。其中只有G₀/G₁期和S期与对照组相比，差异具有统计学意义(P＜0.01)。说明抗菌肽可使细胞周期阻滞于G₀/G₁期，从而抑制S期DNA的合成。抗菌肽和羟基脲的IC₅₀分别为29.98和3644.45 μg/ml。结论 抗菌肽可通过影响细胞周期来发挥抗K562细胞的作用。抗菌肽明显优于羟基脲对K562细胞的增殖抑制作用，有较好的应用前景。

【摘要】 目的 从黄粉虫幼虫体内分离纯化具有抗肿瘤细胞K562的抗菌肽。方法 通过超声诱导黄粉虫幼虫大量表达抗菌肽。然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化黄粉虫幼虫抗菌肽，采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法和光镜观察法筛选对K562有杀伤作用的抗菌肽。结果 离心上清液上样固相萃取柱，经10%、30%、80%的乙腈水溶液洗脱，只有80%的乙腈水溶液分离组分有活性（P＜0.01）。该活性组分经反相高效液相色谱纯化后分离出5个具有抗肿瘤活性的峰物质，这5个峰活性都较强（P＜0.01），其中峰9、峰4能初步确定为抗菌肽，其他3种有待于进一步的实验证明。结论 黄粉虫幼虫体内存在抗肿瘤细胞K562的抗菌肽和抗菌物质，而且不止一种。

【摘要】 目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽，观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用。方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽，然后经过研磨、离心和层析等过程，分离纯化并筛选出抗弓形虫作用的抗菌肽，采用流式细胞术（FCM）分析其对弓形虫速殖子DNA含量的影响。结果 通过DNA含量直方图可以看出，实验组的速殖子数少于对照组，且两组分布参数存在较明显差异。正常的弓形虫速殖子处于M1期的较M2期的少，抗菌肽组则相反，处于M1期的较M2期的多，且M1峰值明显前移。结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽，其可通过抑制弓形虫DNA的合成杀伤弓形虫。